Determinarea contaminarii biologice

 

Determinarea contaminarii biologice cu dispozitivul Merck Dip-Cult combi, cod 1.00778

Bacteriile aerobe se dezvolta pe fateta care contine TTC a fiolei Cult-Dip combi (agar incolor). Drojdiile si ciupercile se dezvolta pe fateta cu dextroza din cartofi (agar portocaliu).

 

 

1. Desurubati capacul si trageti lamela, fara a atinge suprafetele de agar.
2.
a) Scufundati lamela intr-un recipient de lichid sau,
b) umeziti lamela prin pulverizare sau sub un jet de fluid. Daca lichidul este sub presiune, dispozitivul trebuie manipulat cu atentie, ca agarul nu fie dizlocat sau,
c) amestecati esantionul de fluid intr-un recipient si inmuiati dispozitivul in el.
Ambele suprafete de agar trebuie sa fie complet umede. Dispozitivul trebuie sa fie in contact cu fluidul care trebuie examinat pentru aproximativ 5-10 secunde.
3. Permiteti excesului de lichid sa se scurga de pe lamela.
4. Stergeti marginea inferioara a dispozitivului pe o hartie absorbanta curata.
5. Insurubati dispozitivul inapoi in tub (nu foarte strans).
6. Completati eticheta cu datele de identificare a probei si lipiti-o pe tub.
7. Plasati tubul in pozitie verticala intr-un incubator, la 27-30 ° C. Dupa 24-48 ore de incubare, numarul total de bacterii poate fi citit pe fateta incolora agar (TTC).

Drojdiile si ciupercile vor fi evidentiate pe fateta cu mediu agar- dextroza din cartofi,  dupa o incubare de aproximativ 3 zile. Daca incubatia are loc la temperatura camerei, rezultatele pot fi citite dupa 2-4 zile, respectiv 4-7 zile.

8. Dupa incubare, scoateti dispozitivul din tub. Comparati densitatea coloniilor care cresc pe mediu cu diagramele de densitate model (foto atasate), fara a numara efectiv coloniile. Daca temperatura normala a fluidului testat difera in mod substantial de temperatura de incubare mentionata mai sus (este semnificativ mai mica), dezvoltare bacteriilor se produce mai lent. In acest caz, pentru rezultate concludente, se recomanda o temperatura de incubare asemenea celei de lucru a fluidului testat.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Determinarea numarului total de bacterii (agar incolor):

Majoritatea bacteriilor dau nastere unor colonii rosii. Numarul de bacterii / ml din esantion este determinat prin compararea densitatii coloniilor care apar pe diapozitiv cu densitatile prezentate in diagrama model. Daca sunt prezente colonii incolore, acestea trebuie de asemenea luate in considerare la estimarea densitatii de crestere. In cazurile in care apar colonii mari, trebuie amintit ca este densitatea coloniilor care este importanta si nu dimensiunea lor.
Daca continutul de bacterii este foarte mare (peste 10∧7 / ml), exista o crestere confluenta a bacteriilor. Acest lucru poate aparea ca un strat de suprafata uniform rosu.
Acest tip de crestere poate fi interpretat gresit drept un rezultat slab sau negativ si este posibil, in cazuri indoielnice, sa se compare diapozitivul incubat cu unul neutilizat. Nu este posibil sa se acorde limite universal valabile pentru a ilustra numarul microbian critic. Acest lucru trebuie determinat de experienta. Cu ape de proces si diferite lichide de racire se poate folosi urmatorul ghid:

 

numar de bacterii	10∧4	infectare usoara
numar de bacterii	10∧5–10∧6	infectare moderata
numar de bacterii	>= 10∧6	infectare severa

Determinarea drojdiilor si ciupercilor (agar portocaliu):

Cresterea care apare pe diapozitiv poate sa fie formata exclusiv din ciuperci sau drojdii sau poate fi cauzata atat de ciuperci, cat si de drojdii care formeaza crestere mixta. Ciupercile dau nastere unor colonii moi si pufoase, in timp ce coloniile de drojdii sunt de obicei in forma de minge si usor umflate. Uneori sunt plane si uscate. Comparatia cresterii drojdiei cu diagrama modelului se realizeaza ca si in cazul bacteriilor.
Deoarece coloniile fungice pot proveni din fragmente de miceliu sau din spori individuali, rezultatul obtinut prin comparatie cu schema modelului nu este cantitativ, dar arata daca exista o usoara (+), moderata (++) sau severa (+++) .
Coloniile pot fi scoase din diapozitiv si examinate sub microscop. Infectia fungica poate fi, de asemenea, observata cu ochiul liber, ca o acoperire pe suprafata lichidului.

Eliminarea dispozitivelor folosite:

Deoarece culturile incubate sunt culturi bacteriene, ele trebuie manipulate cu grija. Eliminarea dispozitivelor utilizate poate fi realizata prin: 1. incinerare, 2. prin imersarea lamelelor si a tuburilor intr-un dezinfectant, peste noapte, 3. prin autoclavare, dupa slabirea capacului (pentru aceasta poate fi folosita si o oala sub presiune).

Depozitarea:

Fiolele Cult-Dip nedeschise trebuie pastrate la temperatura camerei (aproximativ +20 ° C sau 68 ° F), protejate de lumina si curent. Data expirarii este marcata pe ambalaj. Dispozitivele Cult-Dip combi nu trebuie inghetate!
Fiolele neutilizate, care prezinta o dezvoltare bacteriana, trebuie eliminate.

Nota: materialul de mai sus este o traducere a prospectului elaborat in decembrie 2011

de fabricantul produsului, Merck KGaA, 64271 Darmstadt
Tel. +49 (0)6151 72-2440