Determinarea contaminarii biologice

Instructiuni de folosire

1
Desurubati capacul si trageti lamela, fara a atinge suprafetele de agar.
2
Scufundati lamela intr-un recipient de lichid sau umeziti-o prin pulverizare ori sub un jet de fluid. Daca lichidul este sub presiune, manipulati dispozitivul cu atentie, pentru ca agarul sa nu fie dizlocat. Se poate si amesteca esantionul intr-un recipient, apoi se inmoaie dispozitivul in el.
3
Ambele suprafete de agar trebuie sa fie complet umede. Dispozitivul trebuie sa fie in contact cu fluidul examinat aproximativ 5-10 secunde.
4
Permiteti excesului de lichid sa se scurga de pe lamela, apoi stergeti marginea inferioara a dispozitivului pe o hartie absorbanta curata.
5
Insurubati dispozitivul inapoi in tub, fara a strange foarte tare capacul.
6
Completati eticheta cu datele de identificare ale probei si lipiti-o pe tub.
7
Plasati tubul vertical intr-un incubator, la 27-30 °C. Dupa 24-48 ore, numarul total de bacterii poate fi citit pe fateta incolora agar (TTC). Drojdiile si ciupercile vor fi evidentiate pe agarul portocaliu dupa aproximativ 3 zile. Daca incubatia are loc la temperatura camerei, rezultatele pot fi citite dupa 2-4 zile, respectiv 4-7 zile.
8
Dupa incubare, scoateti dispozitivul din tub si comparati densitatea coloniilor dezvoltate cu diagramele model, fara a numara efectiv coloniile. Daca temperatura normala a fluidului testat este semnificativ mai mica decat temperatura de incubare, se recomanda incubarea la o temperatura apropiata de cea de lucru a fluidului pentru rezultate concludente.

In cazurile in care lichidul este sub presiune sau are caracteristici speciale de curgere, dispozitivul trebuie manipulat cu atentie pentru a evita deteriorarea stratului de agar si compromiterea rezultatului.

Diagrame si referinte vizuale

TTC agar pentru determinarea bacteriilor — **TTC agar (agar incolor)** – folosit pentru determinarea numarului total de bacterii.

Drojdii pe dextroza din cartofi — **Drojdii pe agar portocaliu** – coloniile apar de obicei in forma de minge, usor umflate sau plane si uscate.

Ciuperci pe dextroza din cartofi — **Ciuperci pe agar portocaliu** – coloniile fungice au de regula aspect moale, pufos si se pot evalua orientativ ca usoare, moderate sau severe.

Procedura de incubare si citire — **Incubare si interpretare** – dupa incubare, densitatea cresterii se compara cu diagramele model atasate.

Interpretarea rezultatelor

Determinarea numarului total de bacterii (agar incolor)

Majoritatea bacteriilor dau nastere unor colonii rosii. Numarul de bacterii/ml din esantion este determinat prin compararea densitatii coloniilor de pe diapozitiv cu densitatile prezentate in diagrama model. Daca sunt prezente colonii incolore, acestea trebuie luate in considerare la estimarea densitatii de crestere. In cazurile in care apar colonii mari, trebuie retinut ca densitatea coloniilor este importanta, nu dimensiunea lor.

Daca continutul de bacterii este foarte mare (peste 10^7/ml), apare o crestere confluenta a bacteriilor, care se poate manifesta sub forma unui strat uniform rosu. Acest tip de crestere poate fi interpretat gresit drept un rezultat slab sau negativ; in cazuri indoielnice, se recomanda compararea diapozitivului incubat cu unul neutilizat. Nu exista limite universal valabile pentru numarul microbian critic, acestea fiind stabilite in practica pe baza experientei. Pentru ape de proces si diferite lichide de racire se poate folosi ghidul de mai jos.

10^4infectare usoara

10^5–10^6infectare moderata

>= 10^6infectare severa

numar de bacterii	densitate estimata	nivel de infectare
numar de bacterii	10^4	infectare usoara
numar de bacterii	10^5–10^6	infectare moderata
numar de bacterii	>= 10^6	infectare severa

Determinarea drojdiilor si ciupercilor (agar portocaliu)

Cresterea care apare pe diapozitiv poate fi formata exclusiv din ciuperci sau drojdii ori poate fi cauzata de o crestere mixta. Ciupercile dau nastere unor colonii moi si pufoase, in timp ce coloniile de drojdii sunt de obicei in forma de minge si usor umflate; uneori pot fi plane si uscate. Comparatia cresterii drojdiei cu diagrama modelului se realizeaza similar cu cazul bacteriilor.

Deoarece coloniile fungice pot proveni din fragmente de miceliu sau din spori individuali, rezultatul obtinut prin comparatie cu schema modelului nu este strict cantitativ, dar arata daca exista o contaminare usoara (+), moderata (++) sau severa (+++). Coloniile pot fi scoase din diapozitiv si examinate sub microscop. Infectia fungica poate fi observata si cu ochiul liber, ca o acoperire pe suprafata lichidului.

Eliminarea dispozitivelor folosite

Deoarece culturile incubate sunt culturi bacteriene, ele trebuie manipulate cu grija. Eliminarea dispozitivelor utilizate poate fi realizata prin incinerare, prin imersarea lamelelor si a tuburilor intr-un dezinfectant peste noapte sau prin autoclavare, dupa slabirea capacului (in acest scop poate fi folosita si o oala sub presiune).

Depozitarea

Fiolele Cult-Dip nedeschise trebuie pastrate la temperatura camerei (aproximativ +20 °C sau 68 °F), protejate de lumina si curent. Data expirarii este marcata pe ambalaj. Dispozitivele Cult-Dip combi nu trebuie inghetate. Fiolele neutilizate, care prezinta o dezvoltare bacteriana, trebuie eliminate.